1. 荧光素酶互补实验原理

荧光素酶互补实验（LCI，luciferase complementation imaging）可以用于蛋白质-蛋白质相互作用的研究。萤火虫荧光素酶（LUC，luciferase）可以分为N端和C端两部分，单独的两部分不能自发地重组和发挥功能。只有分别融合了N端和C端的两个蛋白发生相互作用时，LUC的两部分在空间上相互靠近，产生有功能的重组LUC，催化荧光素酶底物发光。

在植物中，通过农杆菌瞬时转化，可以快速在烟草、拟南芥等双子叶植物叶片快速进行蛋白之间的互作检测。该方法简便、高通量、灵敏度高。

图1 荧光素酶互补实验原理图^[1]

2. 荧光素酶互补实验的应用与优点

A. 应用

荧光素酶互补法最初开发用于检测哺乳动物活细胞中的蛋白质-蛋白质相互作用，但后来被用于植物的研究中。借助于烟草的瞬时表达系统，将含有融合蛋白的表达载体转化农杆菌后注射烟草叶片，培养2-3天后，在注射部位均匀涂抹反应底物。通过植物活体成像系统和高灵敏度发光检测仪检测生物发光的强度，从而对蛋白之间的相互作用进行定性和定量分析。此方法已被广泛应用于动植物相关领域的蛋白质互作研究。

B. 优点

① 高度定量，允许在几个数量级的范围内对发光信号进行线性测量。

② 与FRET和BiFC相比，此法可对整个组织或细胞群进行采样，避免了来自单个细胞的偏差。

③ 在黑暗中测量发光，不受叶绿素和细胞壁产生的自荧光的影响。

④ 可用于在组织水平上研究蛋白质-蛋白质相互作用，该技术对于研究组织特异性蛋白质-蛋白质相互作用非常有用。

⑤ 无需显微镜，通过使用植物活体成像系统和板式发光检测仪可以在1-2分钟内收集数据，进行定性和定量分析，同时检测大量的蛋白质组。

⑥ 需要最少的样品处理和实验室培训，操作简便，实验高效。

⑦ LCI作为植物蛋白质相互作用研究的简单工具的可用性将有助于验证从酵母双杂交分析中收集的蛋白质相互作用组数据。

3. 产品简介

Coolaber的荧光素酶互补瞬转试剂盒提供了一套简单高效，适用于多种植物的荧光素酶互补实验的瞬转方法。采用本公司独家研制的侵染缓冲液，广泛适用的表达载体和高灵敏反应底物，明星互作对照组，可以快速获得高质量的互作检测结果。

图2 Coolaber说明书中的烟草注射示意图

A. 产品特点

a. 本产品适用于农杆菌瞬转方式在烟草、拟南芥等双子叶植物叶片中利用荧光素酶互补实验验证蛋白之间的互作。

b. 高效侵染体系，高敏荧光素酶底物。

b. 产品适用性广，灵敏度高，假阳性低，结果可重复性好，操作简单，高通量。